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      平板克隆形成

      待細胞形成單克隆后染色計數,通過計數克隆形成率,可對單個細胞的增殖潛力做定量分析,了解細胞的增殖能力和獨立生存能力,平板克隆形成可用于檢測貼壁細胞。

      技術原理

      克隆形成是測定細胞增殖能力的有效方法之一。單個細胞在體外持續6代以上,其后代所組成的細胞群稱為克隆。這時每個克隆含有50個以上的細胞,大小在0.3-1.0 mm之間,通過計數克隆形成率,可對單個細胞的增殖潛力做定量分析,了解細胞的增殖能力和獨立生存能力。常用的方法有:平板克隆形成實驗和軟瓊脂克隆形成實驗。懸浮細胞克隆形成檢測可使用軟瓊脂克隆形成實驗。

      結果展示

      用待研基因shRNA慢病毒感染AGS細胞,3天后收集細胞,以600/孔接種6孔板,持續培養2周時間,待細胞形成單克隆后染色計數,結果顯示,shRNA下調目的基因表達后,細胞單克隆數量顯著減少,表明待研基因與AGS細胞克隆形成能力及增殖顯著相關。

      參考文獻

      1.Ruan J. etal. Increased expression of cathepsin L: a novel independentprognostic marker of worse outcome in hepatocellular carcinoma patients. PLoSOne. 2014, 9(11):112-136.

      2.Sun R. etal. Down regulation of Thrombospondin2 predicts poor prognosis inpatients with gastric cancer. Mol Cancer. 2014, 13:225.

      3.Ma Y. etal. Prostate cancer cell lines under hypoxia exhibit greater stem-likeproperties. PLoS One. 2011, 6(12):e29170.caspases-3, -6, -7, and -8". J. Biol. Chem. 272 (41): 25719–23.doi:10.1074/jbc.272.41.25719. PMID 9325297.

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