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      Transwell 侵襲實驗

      在Transwell小室間增加基質膠(ECM),細胞進入下室需要先要分泌基質金屬蛋白酶(MMPs)將基質膠降解。計數進入下室的細胞量可反映細胞的侵襲能力

      技術原理

      細胞運動性的研究,尤其是在腫瘤細胞的侵襲轉移中應用很廣泛。腫瘤轉移是惡性腫瘤生物學特征之一,在腫瘤轉移過程中的某些階段,腫瘤細胞表現出較強的運動能力,如腫瘤細胞從原發瘤灶分離,進而侵入到鄰近組織及再穿過血管壁進入血液循環和穿出血管壁進入繼發部位等,因而細胞運動性的研究在弄清腫瘤細胞侵襲和轉移的機制上有重要地位。

      腫瘤運動性的研究方法主要是體外檢測腫瘤細胞主動移行的能力,一般有劃痕實驗、誘導轉移(Transwell)實驗等。

      吉凱基因提供的Transwell實驗,使用Corning轉移實驗試劑盒,其transwell小室是由24孔組織培養板和12孔細胞培養嵌入物組成,嵌入物(即小室)底層含有8 μm孔徑大小的聚碳酸酯膜。實驗時,上室為無血清細胞懸液,下室為含血清的培養基,血清中某些成分如一些細胞因子,對細胞生長來說是必不可少,因此細胞對這些因子具有趨向性,利用細胞的這種趨性促使細胞向下室轉移,細胞發生遷移后會黏附于聚碳酸酯膜底部,以聚碳酸酯膜底部細胞數量來顯示細胞轉移能力,不同細胞在此會顯示不同的運動轉移能力。

      結果展示


      用待研基因shRNA慢病毒感染MDA-MB-231細胞,3天后收集細胞并接種至Transwell小室中,細胞在Transwell小室中孵育18小時后,取出小室,染色并拍照計數,結果顯示,shRNA下調目的基因表達后,侵襲的MDA-MB-231細胞顯著減少,表明MDA-MB-231細胞侵襲能力顯著下降,待研基因與MDA-MB-231細胞侵襲顯著相關。

      參考文獻

      1.Stagg HW. etal. Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand promotes microvascular endothelial cell hyperpermeability through phosphatidylinositol 3-kinase pathway. Am J Surg. 2013 Apr;205(4):419-25.

      2.Jie S. etal. Berberine inhibits angiogenic potential of Hep G2 cell line through VEGF down-regulation in vitro. J Gastroenterol Hepatol. 2011 Jan;26(1):179-85.

      3.Song Y. etal. Effects of RNA interference targeting four different genes on the growth and proliferation of nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells. Cancer Gene Ther. 2011 Apr;18(4):297-304.

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