A: 1.切片過于陳舊,使用新鮮的切片;如果需要進行保存,保存在4°C;
2.玻片上的組織已干化重新補充水分并在染色過程中保持組織被覆蓋在緩沖液中;
3.抗原表達太少,可更換效價比更高的抗體。
A: 1. 洗滌不充分,由于固定劑的殘留而導致高的背景值,應確保在步驟之間用PBS至少洗3次;
2. 固定不充分可能會導致抗原在組織中的擴散,可降低固定后時間;
3. 彌散染色,常由組織損傷導致,小心制備組織樣品以避免組織損傷;
4. 檢測試劑的滲透不充分,制備更薄的切片;
5. 不同固定劑對于組織抗原影響各異,可優化pH,孵育時間和溫度。