Q:流式細胞檢測與western的區別?
A: (1)Western可以檢測多種類型蛋白,但流式主要適合檢測膜蛋白,且抗體通常是直接和熒光基團相連;
(2)Western測蛋白含量對抗體的量需要很少,一般1:1000左右,而流式對抗體的需要量很大,一般1:50 ;
(3)流式細胞檢測可以知道表達目的抗原的細胞占比情況,Western Blot只能比較樣本間目的抗原平均表達情況。
目的細胞按實驗設計組別進行藥物處理后,收集細胞懸液,離心,用緩沖液洗滌,加細胞染色緩沖液重懸后,用PE標記的CD11b抗體進行染色,染色結束后,用細胞染色緩沖液洗滌、重懸,進行流式儀檢測 (Millipore,Guava easyCyte HT),分析各實驗組別中CD11b 陽性細胞百分比差異。