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      ELISA

      利用抗原抗體反應,檢測樣本中目的蛋白的濃度,常用于分泌蛋白的檢測;可通過同批檢測標準品,定量計算得到各實驗組目的蛋白含量。

      技術原理

      ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體─聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證實驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。


      吉凱基因提供基于商品化試劑盒的ELISA實驗服務。大部分試劑盒采用ELISA雙抗體夾心法檢測樣本中目的蛋白的濃度,即目的蛋白捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標本或參考品時,其中的目的蛋白會與捕獲抗體結合,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗目的蛋白抗體后,兩者結合形成夾心的免疫復合物,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合,親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑,若樣本中存在目的蛋白將會形成免疫復合物,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀其450nm處的OD值,目的蛋白濃度與OD450值之間呈正比,通過參考品繪制標準曲線,對照未知樣本中OD值,即可算出標本中目的蛋白濃度。

      結果展示

      標準品 復孔1 復孔2 平均OD值 濃度(pg/mL)
      atandard2 0.152 0.142 0.147 1000
      atandard3 0.089 0.101 0.005 500
      atandard4 0.071 0.082 0.077 250
      atandard5 0.061 0.063 0.062 125
      atandard6 0.054 0.058 0.056 62.5
      零標準 0.05 0.054 0.052 0

      測蛋白ELISA試劑盒對待測各組樣品進行ELISA檢測,通過同批檢測的標準品,制作出檢測OD值與蛋白量的標準曲線,根據待測樣品ELISA測得的OD值,計算得到各實驗組目的蛋白含量。

      參考文獻

      Bellamkonda K, et al. The eicosanoids leukotriene D4 and prostaglandin E2 promote the tumorigenicity of colon cancer-initiating cells in a xenograft mouse model. BMC Cancer. 2016 Jul 7;16:425.
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