吉凱基因提供基于商品化試劑盒的ELISA實驗服務。大部分試劑盒采用ELISA雙抗體夾心法檢測樣本中目的蛋白的濃度,即目的蛋白捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標本或參考品時,其中的目的蛋白會與捕獲抗體結合,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗目的蛋白抗體后,兩者結合形成夾心的免疫復合物,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合,親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑,若樣本中存在目的蛋白將會形成免疫復合物,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀其450nm處的OD值,目的蛋白濃度與OD450值之間呈正比,通過參考品繪制標準曲線,對照未知樣本中OD值,即可算出標本中目的蛋白濃度。
標準品 | 復孔1 | 復孔2 | 平均OD值 | 濃度(pg/mL) |
atandard2 | 0.152 | 0.142 | 0.147 | 1000 |
atandard3 | 0.089 | 0.101 | 0.005 | 500 |
atandard4 | 0.071 | 0.082 | 0.077 | 250 |
atandard5 | 0.061 | 0.063 | 0.062 | 125 |
atandard6 | 0.054 | 0.058 | 0.056 | 62.5 |
零標準 | 0.05 | 0.054 | 0.052 | 0 |
測蛋白ELISA試劑盒對待測各組樣品進行ELISA檢測,通過同批檢測的標準品,制作出檢測OD值與蛋白量的標準曲線,根據待測樣品ELISA測得的OD值,計算得到各實驗組目的蛋白含量。