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      CO-IP

      利用抗原抗體反應,驗證兩種蛋白在細胞內是否結合,通常用于直接互作機制的研究。

      技術原理

      以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的、用于研究蛋白相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在argarose beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離,對B蛋白進行檢測,進而證明兩者間的相互作用。

      結果展示

      利用包含FLAG-GeneB的質粒進行293T細胞株轉染后,3天后裂解細胞抽提蛋白,用anti-FLAG的抗體進行免疫沉淀后,WB檢測到免疫沉淀的蛋白中含有Gene A表達的蛋白。

      參考文獻

      Rosenberg, Ian (2005). Protein analysis and purification: benchtop techniques. Springer. p. 520.
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