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      基因操作工具制備

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      您對組織特異性啟動子有什么問題嗎?

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      組織特異性啟動子

      啟動子通常位于基因編碼區的5' 端上游,是DNA分子上可以與RNA聚合酶特異性結合并使之開始轉錄的部位。通過選擇不同的啟動子,可以控制基因表達(轉錄)的起始時間和表達的程度,是高效表達外源基因的關鍵。根據啟動子的轉錄模式可以將其分為3類:組成型啟動子、組織或器官特異性啟動子和誘導型啟動子。

      優勢

      組成型啟動子

      組成型啟動子所啟動基因的表達具有持續性,亦稱之為廣譜表達啟動子。如果對基因表達沒有時空性的要求,通??蛇x擇此類啟動子。哺乳動物中常用的組成型啟動子有UbC、EF1a、SV40、PGK、CAG等等。


      誘導型啟動子

      誘導型啟動子指在某些特定的物理或化學信號的刺激下,該類型的啟動子可以大幅度地提高基因的轉錄水平,準確、持續并且適時、適量地表達目的基因,特別適合研究自身具有毒性的蛋白。該系統主要由誘導劑、可誘導的受體或轉錄因子、順式作用元件以及載體系統四部分組成。以誘導劑為分類依據可分為:四環素誘導的(Tet)基因表達調控系統、類固醇激素受體誘導的基因表達調控系統、缺氧誘導的基因表達調控系統、高熱誘導的基因表達調控系統、電離輻射誘導的基因表達調控系統和lac基因表達調控系統等。


      組織特異性啟動子

      組織特異性啟動子是指在該啟動子調控下,外源基因的表達一般只發生在某些特定來源的細胞或組織部位,更加適用于疾病機制及治療的研究。

      組織特異性啟動子目前已被廣泛應用于神經、肌肉、骨骼、心血管、眼科、肝臟、腎臟、脂肪、胰腺等多個研究領域。

      載體選擇

      組織特異性啟動子載體的特點:

      1. 解決了在體實驗基因調控的特異性問題。

      2. 組織特異性表達可降低免疫反應。

      3. 如使用腺相關病毒載體,可將特異性啟動子靶向轉錄能力結合AAV血清型靶向感染能力,是一款更精準、更高效的基因操作工具。


      吉凱提供多種特異性啟動子AAV載體供您選擇:涉及神經、心血管、肌肉、肝臟、肺、眼、脂肪、胰腺等研究領域。點擊查看載體圖譜>>

      組織 載體
      編號
      啟動子
      名稱
      啟動子
      特性
      啟動子
      大小
      啟動子
      物種
      載體
      容量/bp
      載體元件順序 熒光是否
      融合表達
      神經 GV466 hSyn 神經元特異
      性啟動子
      0.5kb human 2200 hSyn promoter-MCS-EGFP-3FLAG-SV40 PolyA
      GV589 mecp2 較短的神經
      元特異性啟
      動子
      0.2kb mouse 3100 pAAV-mecp2p-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV595 TUBA1A 早期神經元
      特異性啟動子
      1.2kb human 2100 pAAV-TUBA1Ap-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV581 c-fos 興奮神經元
      啟動子
      1.7kb mouse 1700 pAAV-c-fos promoter-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV602 CaMKlla 前腦谷氨酸
      能神經元特
      異性啟動子
      1.1kb mouse 2000 CaMKIlap-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV600 hVGAT GABA能神
      經元/中間神
      經元特異性
      啟動子
      1.8kb human 1500 pAAV-hVGAT promoter-MCS -EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV596 Slc6a3 多巴胺神經
      元特異性表
      達啟動子
      1.2kb mouse 2100 pAAV-SIc6a3p-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV488 gfaABC 星形膠質細
      胞特異性啟
      動子
      0.9kb human 1600 gfaABC1D promoter-MCS-EGFP-WPRE-bGH PolyA
      GV577 1ba1 小膠質細胞
      特異性啟動
      1.5kb mouse 1900 pAAV-lba1p-EGFP-MCS-3Flag-SV40 PolyA
      GV587 CNP 少突膠質細
      胞或施萬細
      胞特異性表
      達啟動子
      1. 5kb mouse 1700 pAAV-CNPp-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      肌肉 GV571 cTNT 心肌細胞特
      異性啟動子
      0.7kb chicken 2500 pAAV-cTNT-MCS-3Flag-T2A-EGFP-SV40 PolyA
      GV580 nNkx2.5 心肌細胞早
      期特異性啟
      動子
      1.2kb mouse 2100 pAAV-mNkx2.5p-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV597 SM22a 平滑肌特異
      性啟動子
      0.5kb mouse 2800 pAAV-SM22ap-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV578 MCK 肌肉特異性
      啟動子
      1.3kb mouse 2000 pAAV-MCKp-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV582 MYOG 成肌細胞特
      異性啟動子
      1.4kb mouse 2000 pAAV-MYOGp-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV588 ACTA1 肌細胞特異
      性啟動子
      1.2kb mouse 2100 pAAV-ACTA1p-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      骨骼 GV586 COL2A1 軟骨細胞特
      異性啟動子
      1.2kb mouse 2100 pAAV-COL2A1p-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV584 mRUNX2 成骨細胞早
      期特異性啟
      動子
      1kb mouse 2300 pAAV-mRUNX2p-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV598 SP-C 肺上皮細胞
      特異性
      0.3kb mouse 3000 pAAV-SP-Cp-MCS -EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      肝臟 GV599 TBG 肝臟特異性 0.4kb human 2900 pAAV-TBGp-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      胰腺 GV579 PDX1 胰腺細胞特
      異性啟動子
      1.2kb mouse 2100 pAAV-PDX1p-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      脂肪 GV585 FABP4 脂肪細胞特
      異性啟動子
      1.6kb mouse 1700 pAAV-FABP4p-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      內皮 GV583 TIE 內皮細胞特
      異性啟動子
      1.2kb mouse 2100 pAAV-TIEp-EGFP-MCS-3Flag-SV40 PolyA
      角質層 GV601 K14 角化細胞特
      異性表達
      1.5kb mouse 1700 pAAV-K14p-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      視網膜 GV590 rpe65 視網膜特異
      性啟動子
      0.7kb mouse 2600 pAAV-rpe65p-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA

      血清型選擇

      根據衣殼蛋白的差異,目前AAV可分為12種血清型(AAV-1~AAV-12)和100多種變異,不同血清型轉染的細胞類型和感染效率也各不相同。如將AAV血清型靶向感染能力結合特異性啟動子靶向轉錄能力,可進一步提升基因調控的特異性。那么如何選擇合適的血清型呢,首先我們需要了解下AAV不同血清型的組織趨向性。

      血清型 簡介
      1 順行示蹤跨單突觸。適合神經等方向的研究
      2 胞外吸附分子為硫酸乙酰肝素蛋白多糖,適合于神經等方向的研究
      5 胞外吸附分子為N-唾液酸,適合肺、眼睛、神經等
      6 適合血液細胞,比如T細胞
      8 適合肝臟,受體為LamR
      9 最廣譜的血清型,感染全身效果極好,可以穿過血腦屏障、眙盤屏障
      DJ 適合體外實驗、細胞
      DJ/8 適合肝臟,眼,中樞神經,肌肉
      PHP.eB 基于PHP.B,加強版,更適合中樞神經系統
      PHP.B 在神經元和神經膠質中感染效率超高,大約是9型的40倍。
      PHP.S 能夠感染外周神經元
      Retro 逆向標記血清型


      吉凱為您總結不同部位適合的血清型,供您參考。


      1 2 5 6 8 9 DJ PHP.eB PHP.S Retro
      心臟






      肝臟












      胰腺






      骨骼肌




      神經

      眼部








      吉凱小建議:

      1. 如您不確定選擇哪種血清型,可嘗試使用感染譜最廣的9型。

      2. 如初次使用AAV,可使用 AAV 彩虹裝>> 進行預實驗,通過彩虹裝比較不同血清型對目標組織的感染效果,摸索最佳的注射方法、注射位點、病毒用量等,以便得到更理想的實驗結果。

      * 注:AAV彩虹裝是吉凱基因通過查詢相關文獻將適合不同組織的常用血清型組合而成的套裝產品。


      了解更多腺相關病毒技術資料、包裝流程等信息,請點擊這里>>

      應用實例

      以下為吉凱客戶使用組織特異性啟動子AAV病毒的示例。


      1. 神經系統

      1.1 CaMKIIα特異性啟動子在谷氨酸能神經元對認知行為調控研究中的應用

      病毒類型:組織特異性啟動子AAV

      載體:AAV9-CaMKIIa-eNpHR3.0-mCherry

      注射部位:杏仁核

      注射方式:腦立體注射

      病毒用量: 0.2ul

      觀察吋囘: 21天

      AAV9-CaMKIIα-eNpHR3.0-mCherry注射到BLA抑制小鼠基底外側杏仁核后,冠狀腦切片mCherry(紅色)的表達


      1.2 CaMKIIα特異性啟動子在抑郁癥研究領域的應用

      病毒類型:組織特異性啟動子AAV

      載體:AAV9-CaMKⅡα-Cre-mCherry

      注射部位:小鼠前額葉皮質

      注射方式:腦立體注射

      病毒用量:0.5ul





      2. 心血管系統

      cTNT啟動子在心血管系統中的應用

      病毒類型:組織特異性啟動子AAV

      載體:AAV9-cTNT-目的基因

      注射部位:新生小鼠心肌原位注射

      注射用量:1ul

      觀察時間:7天



      心肌注射(1E+10 v.g./位點)


      更多病毒在體注射劑量參數及文獻資料請點擊工具病毒在神經領域、眼科、心血管、肝臟、肺等方向上的應用>>

      引用文獻

      1. Gephyrin Palmitoylation in Basolateral Amygdala Mediates the Anxiolytic Action of Benzodiazepine. Biological Psychiatry (IF= 11.982). 吉凱產品過表達AAV  研究領域:焦慮癥  華中科技大學同濟醫學院

      2. Gene deficiency and pharmacological inhibition of caspase-1 confers resilience to chronic social defeat stress via regulating the stability of surface AMPARs. Molecular Psychiatry (IF= 11.64). 吉凱產品:過表達AAV  血清型:AAV1 研究領域:抑郁癥  華中科技大學同濟醫學院

      3. Hippocampal PPARα is a novel therapeutic target for depression and mediates the antidepressant actions of fluoxetine in mice. British journal of pharmacology (IF= 6.81). 吉凱產品:干擾AAV 研究領域:抑郁癥  南通大學藥學院

      4. Overexpression of LH3 reduces the incidence of hypertensive intracerebral hemorrhage in mice. JOURNAL OF CEREBRAL BLOOD FLOW AND METABOLISM (IF=6.045). 吉凱產品:干擾AAV 血清型:AAV9 研究領域:高血壓性腦出血  中國醫學科學院阜外醫院

      5. Long non-coding RNA H19 contributes to apoptosis of hippocampal neurons by inhibiting let-7b in a rat model of temporal lobe epilepsy. Cell Death and Disease (IF=5.638). 吉凱產品:干擾和過表達AAV  血清型:AAV9  研究領域:顳葉癲癇  首都醫科大學

      6. Mesenchymal Stem Cells with Enhanced Bcl-2 Expression Promote Liver Recovery in a Rat Model of Hepatic Cirrhosis. Cellular Physiology and Biochemistry (IF=5.5). 吉凱產品:過表達AAV 研究領域:肝硬化  哈爾濱醫科大學附屬第二醫院

      7. LncRNA H19 contributes to hippocampal glial cell activation via JAK/STAT signaling in a rat model of temporal lobe epilepsy. Journal of Neuroinflammation (IF=5.193). 吉凱產品:干擾和過表達AAV 血清型:AAV9  研究領域:顳葉癲癇  首都醫科大學

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