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基因研究中常需要通過上調靶基因的表達來觀察表型變化。過表達（Over-Expression，OE）是上調基因表達最常用的方法，其基本原理是將目的基因的編碼區（coding sequence，CDS）構建到質?；虿《据d體中，導入細胞內使基因的表達量增加。根據用途，載體主要分為克隆載體、原核表達載體、真核表達載體、慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體、 逆轉錄病毒載體等。
過表達如何選擇合適的載體呢？
首先我們需要考慮這幾個方面:
1. 工具載體的表達時間與實驗觀察時間是否相符;
2. 工具載體可以容納的片段大小與目的基因大小是否契合;
3. 工具載體對目的細胞、在體組織的轉導是否足夠高效。
|
|
質粒 | 慢病毒 | 腺病毒 | 腺相關病毒 |
| 外源基因表達時間 |
24h開始表達 持續3-7天 |
2-4天開始表達 長時間穩定表達 |
1-2天開始表達 持續7-14天 |
7-14開始表達 細胞分裂不旺盛部位可長時間表達 |
| 插入片段大小 | < 5-8kb | < 4kb | < 5-8kb |
<2.8kb (包括必須的啟動 子以及熒光或者標簽元件) |
| 穩定細胞株篩選 | 可以，但較難操作 |
可以，外源基因整合于 主基因組，篩選簡單 |
不可以，瞬時表達外源 基因傳代后效果減弱 |
不可以 |
| 細胞實驗 |
細胞系，部分細胞 轉染效率較低 |
首選， 廣譜，感染效率高 |
廣譜，感染效率高， 適合原代非增殖細胞感染 |
不適合細胞實驗 |
| 動物實驗 | 不適合 |
適合， 根據觀察時間 和注射部位選擇 |
較適合(免疫原性高)， 根據觀察時間和注射部位選擇 |
首選， 根據觀察時間和注射部位選擇 |
| 滴度 | 無 | 最高可達109TU/ml | 高達1012pfu/ml | 高達1012-13v.g/ml |
其次，我們需要了解載體中的每一個元件代表什么。實際應用中，可根據實驗目的來挑選合適的載體元件。下面是載體圖譜上常見元件介紹：如啟動子、熒光標簽、抗性、多克隆酶切位點MCS等。
吉凱提供過表達質粒、慢病毒、腺病毒、腺相關病毒AAV等產品。請點擊這里查詢與購買>>
| 類別 | 產品名稱 | 簡介 | 產品規格 |
| 質粒 | cDNA克隆(現貨) | 提供無錯義、插入、缺失、顛倒、移碼突變的CDS模版序列 | 10ug |
| 過表達質粒 | 用于過表達編碼基因/incRNA | 10ug (含等量對照) | |
| 慢病毒 | 過表達慢病毒(現貨) | 用于過表達編碼基因/IncRNA |
5E+7TU/1E+8TU (含等量對照) |
| 過表達慢病毒 | 用于過表達編碼基因/IncRNA | 1E+8TU (含等量對照) | |
| 過表達慢病毒(Tet-on ) | Tet on誘導過表達慢病毒 | 1E+8TU (含等量對照) | |
| 腺病毒 | 過表達腺病毒(現貨) | 用于過表達編碼基因/IncRNA | 2E+10PFU (含等量對照) |
| 過表達腺病毒 | 用于過表達編碼基因/IncRNA | 2E+10PFU(含等量對照) | |
| 腺相關病毒 | 工具腺相關病毒(現貨) |
光遺傳、化學遺傳、鈣指示劑、 熒光示蹤、重組酶等108種現貨AAV |
1E+12v.g.-1E+13v.g |
| 過表達腺相關病毒 | 用于過表達編碼基因/IncRNA | 1E+12v.g (含等量對照) |
吉凱提供用于過表達編碼基因和非編碼基因的質粒、慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等多種載體。點擊查看載體圖譜>>
| 產品類別 | 載體編號 | 元件順序 |
| 質粒過表達 | GV609 | MCS-firefly_ Luciferase |
| GV608 | MCS-firely_ Luciferase | |
| GV486 | CMV-left circular frame-MCS-right circular frame-EF1a-copGFP-SV40-Neomycin | |
| GV485 | CMV-left circular frame-MCS-right circular frame- SV40-neomycin | |
| GV272 | SV40-firefly_ Luciferase-MCS | |
| GV238 | MCS-firefly_ Luciferase | |
| GV230 | CMV-MCS-EGFP-SV40-Neomycin | |
| 慢病毒過表達 | GV365 | Ubi-MCS-3FL AG-CMV-EGFP |
| GV320 | Ubi-MCS-3FLAG-SV40-Cherry | |
| GV341 | Ubi-MCS-3FLAG-SV40-puromycin | |
| GV358 | Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin | |
| GV492 | Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES -puromycin | |
| 慢病毒過表達Tet-on | GV308 | TetlP-MCS-3FLAG-Ubi-TetR-IRES-Puromycin |
| 腺病毒過表達 | GV345 | CMV-MCS-3FLAG-SV40-Cherry |
| GV314 | CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP | |
| 腺相關病毒過表達 | GV388 | CMV bGlobin-MCS-EGFP-3FLAG-WPRE-hGH polyA |
| GV389 | CMV bGlobin-MCS-mCherry-3FLAG-WPRE-hGH polyA | |
| GV410 | CMV bGlobin-MCS-3FLAG-T2A-EGFP | |
| GV411 | CMV-betaGlobin-MCS-3Flag-SV40 PolyA | |
| GV461 | CMV-betaGlobin-MCS-SV40 PolyA | |
| GV467 | CMV-betaGlobin-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA | |
| GV489 | CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA | |
| GV466 | hSyn promoter-MCS-EGFP-3FLAG-SV40 PolyA | |
| GV475 | hSyn promoter-MCS-mcherry-3FLAG-SV40 PolyA | |
| GV488 | gfaABC1D promoter-MCS-EGFP-WPRE-bGH PolyA |
1. Identification of genomic alterations in oesophageal squamous cell cancer. 2014, Nature (IF= 41.577). 吉凱產品：過表達質粒 研究領域：食管鱗狀細胞癌 中國醫學科學院
2. The Primate-Specific Gene TMEM14B Marks Outer Radial Glia Cells and Promotes Cortical Expansion and Folding. 2017, Cell stem cell (IF= 23.29). 吉凱產品：過表達質粒 研究領域：神經 中科院生物物理所
3. The metabolic ER stress sensor IRE1α suppresses alternative activation of macrophages and impairs energy expenditure in obesity. 2017, NATURE IMMUNOLOGY (IF=21.506). 吉凱產品：過表達慢病毒 研究領域：能量代謝 中國科學院上海生命科學研究院營養科學研究所
4. Cardiac Fibroblast-Specific Activating Transcription Factor 3 Protects Against Heart Failure by Suppressing MAP2K3-p38 Signaling. 2017, Circulation (IF= 18.881). 吉凱產品：過表達腺病毒 研究領域：心力衰竭 首都醫科大學附屬安貞醫院
5. Yes-Associated Protein Promotes Angiogenesis Via Signal Transducer and Activator of Transcription 3 in Endothelial Cells. 2018, Circulation research (IF= 15.211). 吉凱產品：過表達腺病毒 研究領域：血管生成 天津醫科大學
6. Transplanted Mesenchymal Stem Cells Reduce Autophagic Flux in Infarcted Hearts via the Exosomal Transfer of mir-125b. 2018, Circulation research (IF= 15.211). 吉凱產品：過表達腺病毒 研究領域：心肌梗死 浙江大學第二附屬醫院
7. EphrinB2 Regulates Cardiac Fibrosis Through Modulating the Interaction of Stat3 and TGF-β/Smad3 Signaling. 2017, Circulation Research (IF=13.965). 吉凱產品：RNAi慢病毒和過表達慢病毒 研究領域：心臟纖維化 浙江大學醫學院附屬第二醫院
8. Aldehyde dehydrogenase-2 (ALDH2) opposes hepatocellular carcinoma progression by regulating AMP-activated protein kinase signaling in mice. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凱產品：過表達慢病毒 研究領域：肝癌 第二軍醫大學
9. Deficiency of tumor suppressor NDRG2 leads to attention deficit and hyperactive behavior. 2017, The Journal of Clinical Investigation (IF=13.251). 吉凱產品：過表達腺病毒 研究領域：多動癥 空軍軍醫大學(第四軍醫大學)附屬西京醫院
10. Gephyrin Palmitoylation in Basolateral Amygdala Mediates the Anxiolytic Action of Benzodiazepine. Biological Psychiatry (IF= 11.982). 吉凱產品：過表達AAV 研究領域：焦慮癥 華中科技大學同濟醫學院
11. Gene deficiency and pharmacological inhibition of caspase-1 confers resilience to chronic social defeat stress via regulating the stability of surface AMPARs. Molecular Psychiatry (IF= 11.64). 吉凱產品：過表達AAV 血清型：AAV1 研究領域：抑郁癥。華中科技大學同濟醫學院
12. Long non-coding RNA H19 contributes to apoptosis of hippocampal neurons by inhibiting let-7b in a rat model of temporal lobe epilepsy. Cell Death and Disease (IF=5.638). 吉凱產品：干擾和過表達AAV 血清型：AAV9 研究領域：顳葉癲癇 首都醫科大學
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