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      基因操作工具制備

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      全基因組過表達文庫

      基因研究中常需要通過上調靶基因的表達來觀察表型變化。過表達(Over-Expression,OE)是上調基因表達最常用的方法,其基本原理是將目的基因的編碼區(coding sequence,CDS)構建到質?;虿《据d體中,導入細胞內使基因的表達量增加。根據用途,載體主要分為克隆載體、原核表達載體、真核表達載體、慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體、 逆轉錄病毒載體等。

      過表達

      過表達如何選擇合適的載體呢?

      首先我們需要考慮這幾個方面:

      1. 工具載體的表達時間與實驗觀察時間是否相符;

      2. 工具載體可以容納的片段大小與目的基因大小是否契合;

      3. 工具載體對目的細胞、在體組織的轉導是否足夠高效。


      質粒 慢病毒 腺病毒 腺相關病毒
      外源基因表達時間 24h開始表達
      持續3-7天
      2-4天開始表達
      長時間穩定表達
      1-2天開始表達
      持續7-14天
      7-14開始表達
      細胞分裂不旺盛部位可長時間表達
      插入片段大小 < 5-8kb < 4kb < 5-8kb <2.8kb (包括必須的啟動
      子以及熒光或者標簽元件)
      穩定細胞株篩選 可以,但較難操作 可以,外源基因整合于
      主基因組,篩選簡單
      不可以,瞬時表達外源
      基因傳代后效果減弱
      不可以
      細胞實驗 細胞系,部分細胞
      轉染效率較低
      首選,
      廣譜,感染效率高
      廣譜,感染效率高,
      適合原代非增殖細胞感染
      不適合細胞實驗
      動物實驗 不適合 適合,
      根據觀察時間
      和注射部位選擇
      較適合(免疫原性高),
      根據觀察時間和注射部位選擇
      首選,
      根據觀察時間和注射部位選擇
      滴度 最高可達109TU/ml 高達1012pfu/ml 高達1012-13v.g/ml



      其次,我們需要了解載體中的每一個元件代表什么。實際應用中,可根據實驗目的來挑選合適的載體元件。下面是載體圖譜上常見元件介紹:如啟動子、熒光標簽、抗性、多克隆酶切位點MCS等。


      產品介紹

      吉凱提供過表達質粒、慢病毒、腺病毒、腺相關病毒AAV等產品。請點擊這里查詢與購買>>

      類別 產品名稱 簡介 產品規格
      質粒 cDNA克隆(現貨) 提供無錯義、插入、缺失、顛倒、移碼突變的CDS模版序列 10ug
      過表達質粒 用于過表達編碼基因/incRNA 10ug (含等量對照)
      慢病毒 過表達慢病毒(現貨) 用于過表達編碼基因/IncRNA 5E+7TU/1E+8TU
      (含等量對照)
      過表達慢病毒 用于過表達編碼基因/IncRNA 1E+8TU (含等量對照)
      過表達慢病毒(Tet-on ) Tet on誘導過表達慢病毒 1E+8TU (含等量對照)
      腺病毒 過表達腺病毒(現貨) 用于過表達編碼基因/IncRNA 2E+10PFU (含等量對照)
      過表達腺病毒 用于過表達編碼基因/IncRNA 2E+10PFU(含等量對照)
      腺相關病毒 工具腺相關病毒(現貨) 光遺傳、化學遺傳、鈣指示劑、
      熒光示蹤、重組酶等108種現貨AAV
      1E+12v.g.-1E+13v.g
      過表達腺相關病毒 用于過表達編碼基因/IncRNA 1E+12v.g (含等量對照)

      載體選擇

      吉凱提供用于過表達編碼基因和非編碼基因的質粒、慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等多種載體。點擊查看載體圖譜>>

      產品類別 載體編號 元件順序
      質粒過表達 GV609 MCS-firefly_ Luciferase
      GV608 MCS-firely_ Luciferase
      GV486 CMV-left circular frame-MCS-right circular frame-EF1a-copGFP-SV40-Neomycin
      GV485 CMV-left circular frame-MCS-right circular frame- SV40-neomycin
      GV272 SV40-firefly_ Luciferase-MCS
      GV238 MCS-firefly_ Luciferase
      GV230 CMV-MCS-EGFP-SV40-Neomycin
      慢病毒過表達 GV365 Ubi-MCS-3FL AG-CMV-EGFP
      GV320 Ubi-MCS-3FLAG-SV40-Cherry
      GV341 Ubi-MCS-3FLAG-SV40-puromycin
      GV358 Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin
      GV492 Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES -puromycin
      慢病毒過表達Tet-on GV308 TetlP-MCS-3FLAG-Ubi-TetR-IRES-Puromycin
      腺病毒過表達 GV345 CMV-MCS-3FLAG-SV40-Cherry
      GV314 CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP
      腺相關病毒過表達 GV388 CMV bGlobin-MCS-EGFP-3FLAG-WPRE-hGH polyA
      GV389 CMV bGlobin-MCS-mCherry-3FLAG-WPRE-hGH polyA
      GV410 CMV bGlobin-MCS-3FLAG-T2A-EGFP
      GV411 CMV-betaGlobin-MCS-3Flag-SV40 PolyA
      GV461 CMV-betaGlobin-MCS-SV40 PolyA
      GV467 CMV-betaGlobin-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
      GV489 CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA
      GV466 hSyn promoter-MCS-EGFP-3FLAG-SV40 PolyA
      GV475 hSyn promoter-MCS-mcherry-3FLAG-SV40 PolyA
      GV488 gfaABC1D promoter-MCS-EGFP-WPRE-bGH PolyA

      引用文獻

      1. Identification of genomic alterations in oesophageal squamous cell cancer. 2014, Nature (IF= 41.577). 吉凱產品:過表達質粒  研究領域:食管鱗狀細胞癌  中國醫學科學院

      2. The Primate-Specific Gene TMEM14B Marks Outer Radial Glia Cells and Promotes Cortical Expansion and Folding. 2017, Cell stem cell (IF= 23.29). 吉凱產品:過表達質粒  研究領域:神經  中科院生物物理所

      3. The metabolic ER stress sensor IRE1α suppresses alternative activation of macrophages and impairs energy expenditure in obesity. 2017, NATURE IMMUNOLOGY (IF=21.506). 吉凱產品:過表達慢病毒  研究領域:能量代謝  中國科學院上海生命科學研究院營養科學研究所

      4. Cardiac Fibroblast-Specific Activating Transcription Factor 3 Protects Against Heart Failure by Suppressing MAP2K3-p38 Signaling. 2017, Circulation (IF= 18.881). 吉凱產品:過表達腺病毒  研究領域:心力衰竭  首都醫科大學附屬安貞醫院

      5. Yes-Associated Protein Promotes Angiogenesis Via Signal Transducer and Activator of Transcription 3 in Endothelial Cells. 2018, Circulation research (IF= 15.211). 吉凱產品:過表達腺病毒  研究領域:血管生成  天津醫科大學

      6. Transplanted Mesenchymal Stem Cells Reduce Autophagic Flux in Infarcted Hearts via the Exosomal Transfer of mir-125b. 2018, Circulation research (IF= 15.211). 吉凱產品:過表達腺病毒  研究領域:心肌梗死  浙江大學第二附屬醫院

      7. EphrinB2 Regulates Cardiac Fibrosis Through Modulating the Interaction of Stat3 and TGF-β/Smad3 Signaling. 2017, Circulation Research (IF=13.965). 吉凱產品:RNAi慢病毒和過表達慢病毒  研究領域:心臟纖維化  浙江大學醫學院附屬第二醫院

      8. Aldehyde dehydrogenase-2 (ALDH2) opposes hepatocellular carcinoma progression by regulating AMP-activated protein kinase signaling in mice. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凱產品:過表達慢病毒  研究領域:肝癌  第二軍醫大學

      9. Deficiency of tumor suppressor NDRG2 leads to attention deficit and hyperactive behavior. 2017, The Journal of Clinical Investigation (IF=13.251). 吉凱產品:過表達腺病毒  研究領域:多動癥  空軍軍醫大學(第四軍醫大學)附屬西京醫院

      10. Gephyrin Palmitoylation in Basolateral Amygdala Mediates the Anxiolytic Action of Benzodiazepine. Biological Psychiatry (IF= 11.982). 吉凱產品:過表達AAV  研究領域:焦慮癥  華中科技大學同濟醫學院

      11. Gene deficiency and pharmacological inhibition of caspase-1 confers resilience to chronic social defeat stress via regulating the stability of surface AMPARs. Molecular Psychiatry (IF= 11.64). 吉凱產品:過表達AAV  血清型:AAV1  研究領域:抑郁癥。華中科技大學同濟醫學院

      12. Long non-coding RNA H19 contributes to apoptosis of hippocampal neurons by inhibiting let-7b in a rat model of temporal lobe epilepsy. Cell Death and Disease (IF=5.638). 吉凱產品:干擾和過表達AAV  血清型:AAV9  研究領域:顳葉癲癇  首都醫科大學

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