RNA干擾(RNA interference, RNAi),是指由小干擾RNA(small interfering RNA, siRNA)所介導的轉錄后基因沉默現象(下圖)。雙鏈RNA(double strand RNA, dsRNA)與RNAi核酸酶Dicer結合后,被切割成21~23nt的siRNA,再被輸送到RNA誘導沉默復合物(RNA-induced silencing complex,RISC),并引導RISC與同源性mRNA結合。核酸酶在siRNA反義鏈與mRNA所形成的雙鏈區的中央區域切斷并降解mRNA,導致靶基因的轉錄后沉默。
RNAi 可特異性的抑制靶基因表達,不僅能靈活組合同時抑制多個靶基因,還可用于大規模的基因篩選,已被廣泛用于基因功能研究和基因治療領域。
RNAi原理
RNA干擾和CRISPR/Cas9的比較
RNA干擾和CRISPR/Cas9 基因敲除都是下調基因表達的操作方法。那么,這兩種方法如何選擇呢?首先,我們需要先了解它們的區別。
RNA干擾是從mRNA水平對目的基因進行敲減,而CAS9是從基因組水平對基因進行敲除,可完全消除目的基因在細胞內的表達,靶蛋白的功能也因此完全喪失。此外,CAS9靶點選擇范圍可以擴大到所有基因組序列,如啟動子、內含子等等都可以被剪切。
對比 | RNAi | CRISPR/Cas9基因敲除 |
作用水平 | mRNA水平 | 基因組水平 |
靶位點范圍 | 僅轉錄本 | 所有基因組序列,如外顯子、內含子、啟動子、增強子、基因間序列等 |
靶蛋白消除水平 | 不完全消除 | 完全消除 |
靶蛋白功能 | 部分喪失 | 完全喪失 |
RNAi與CRISPR/Cas9 基因敲除的比較
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產品類別 | 產品名稱 | 簡介 | 產品規格 |
質粒 | RNAi-Eeay- shRNA質粒 |
用于下調編碼基因/IncRNA, 提供3個干擾靶點序列, 確保其中1個有效 |
10ug (含等量對照) |
RNAi-定制-shRNA質粒 |
用于下調編碼基因/IncRNA, 需提供靶點序列 |
10ug (含等量對照) | |
慢病毒 | RNAi-有效靶點-慢病毒( 現貨) |
用于下調編碼基因/IncRNA, 提供1個干擾靶點序列, 確保293細胞50%干擾效率 |
1E+8TU (含等量對照) |
RNAi-定制-慢病毒 |
用于下調編碼基因/IncRNA, 需提供靶點序列 |
1E+8TU (含等量對照) | |
RNAi-定制-慢病毒( Tet-on ) | Tet on誘導干擾慢病毒 | 1E+8TU (含等量對照) | |
RNAi-Eeay-慢病毒 |
用于下調編碼基因/IncRNA, 提供3個干擾靶點序列, 確保其中1個有效 |
1E+8TU (含等量對照) | |
腺病毒 | RNAi-定制-腺病毒 |
用于下調編碼基因/IncRNA, 需提供靶點序列 |
2E+10PFU (含等量對照) |
RNAi-Eeay-腺病毒 |
用于下調編碼基因/IncRNA, 提供3個干擾靶點序列, 確保其中1個有效 |
2E+10PFU (含等量對照) | |
腺相關病毒AAV | RNAi-定制-腺相關病毒 |
用于下調編碼基因/IncRNA, 需提供靶點序列 |
1E+12v.g (含等量對照) |
RNAi-外源篩靶-腺相關病毒 |
用于下調編碼基因, 預設計3個干擾靶點序列, 在293細胞中篩選, 提供其中1個有效靶點 |
1E+12v.g (含等量對照) |
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調控方式 | 載體編號 | 元件順序 |
質粒干擾 | GV102 | hU6-MCS-CMV-GFP- SV40-Neomycin |
慢病毒 | GV112 | hU6-MCS -CMV- Puromycin |
GV115 | hU6-MCS-CMV-EGFP | |
GV248 | hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin | |
GV298 | U6-MCS-Ubiquitin-Cherry-IRES-puromycin | |
GV493 | hU6-MCS-CBh-gcGFP-IRES-puromycin | |
GV307 | TetllP-TurboRFP-MCS(MIR30)-Ubi-TetR- -IRES-Puromycin | |
腺病毒干擾 | GV119 | hU6-MCS-CMV-EGFP |
AAV干擾 | GV478 | U6-MCS-CAG-EGFP |
GV480 | U6-MCS-CAG-mCherry |
6. Melatonin-mediated inhibition of Cav3.2 T-type Ca2+ channels induces sensory neuronal hypoexcitability through the novel protein kinase C-eta isoform. 2018, Journal of Pineal Research (IF= 11.613). 吉凱產品:干擾腺病毒 研究領域:神經 蘇州大學
7. Hippocampal PPARα is a novel therapeutic target for depression and mediates the antidepressant actions of fluoxetine in mice. British journal of pharmacology (IF= 6.81). 吉凱產品:干擾AAV 研究領域:抑郁癥 南通大學藥學院