AAV相比于其他病毒載體的優勢:
a. 表達時間長: 絕大多數重組rAAV 不會整合到基因組上,而是在宿主細胞中串聯形成附加體(episome)存在于細胞核中 ,細胞在細胞復制和分裂后會丟失附加體,并因此失去基因表達能力,rAAV在細胞分裂不旺盛的組織中可持續表達6個月以上;
b. 擴散性強: rAAV 的體積小,滴度高,因此具有遠高于腺病毒和慢病毒的擴散性,可以穿透血腦屏障,是理想的神經元和膠質細胞感染工具;
c. 特異性強: rAAV 有十數種常用的血清型,不同的血清型對不同的臟器有較高的識別及感染能力,是動物實驗首選;
d. 安全性高: 目前還沒有發現AAV 對人體致病,是美國FDA 批準的可以直接用于人體基因治療的最安全的病毒載體;
e. 免疫原性低: 當AAV 用局部大劑量感染肌肉、腦、眼等組織時,不易造成免疫反應;
f. 高穩定性: rAAV 病毒在4℃可以保存1 周,并且對氯仿等試劑具有抗性。
病毒表達系統 |
腺相關病毒 (Adeno-Associate virus) |
慢病毒 (Lentivirus) |
腺病毒 (Adenovirus) |
病毒基因組 | 單鏈DNA病毒 | RNA病毒 | 雙鏈DNA病毒 |
復制 | 條件復制 | 不可復制 | 條件復制 |
滴度 | 最高可達1012-13v.g/ml | 最高可達109TU/ml | 最高可達1012pfu/ml |
感染細胞類型 | 感染分裂不旺盛的細胞 | 感染分裂和不分裂細胞 | 感染分裂和不分裂細胞 |
表達豐度 | 高水平表達 | 中到高水平表達 | 高水平表達 |
表達時間 | 1-2周 | 慢(2-4天) | 快(1-2天) |
持續表達時間 |
病毒基因組游離于宿主基因組外, 在分裂旺盛的細胞中可長時間表達 |
病毒基因組整臺于宿主基因組, 長時間、穩定表達外源基因 |
病毒基因組游離于宿主基因組外, 瞬時表達外源基因 |
克隆容量 | 適合表達小于2.8kb的外源片段 | 適合表達小于4kb的外源片段 | 適合表達小于5kb的外源片段 |
免疫原性 | 低免疫原性 | 低免疫原性 | 較高免疫原性 |
安全性 |
暫無發現致病性, 已通過歐盟和FDA許可, 用作基因治療藥物的載體 |
暫無發現致病性, 已被用于CAR-T治療作用于人體 |
可能會引起一些咳嗽流涕 |
根據衣殼蛋白的差異,目前AAV可分為12種血清型(AAV-1~AAV-12)和100多種變異體。不同的AAV 具有不同的衣殼蛋白空間結構、序列和組織特異性,因而其識別與結合的細胞表面受體也相應有很大差別,這也導致不同血清型轉染的細胞類型和感染效率也各不相同,那么如何選擇合適的血清型呢,首先我們需要了解下AAV 不同血清型的組織趨向性。
血清型 | 簡介 |
1 | 順行示蹤跨單突觸。適合神經等方向的研究 |
2 | 胞外吸附分子為硫酸乙酰肝素蛋白多糖,適合于神經等方向的研究 |
5 | 胞外吸附分子為N-唾液酸,適合肺、眼睛、神經等 |
6 | 適合血液細胞,比如T細胞 |
8 | 適合肝臟,受體為LamR |
9 | 最廣譜的血清型,感染全身效果極好,可以穿過血腦屏障、眙盤屏障 |
DJ | 適合體外實驗、細胞 |
DJ/8 | 適合肝臟,眼,中樞神經,肌肉 |
PHP.eB | 基于PHP.B,加強版,更適合中樞神經系統 |
PHP.B | 在神經元和神經膠質中感染效率超高,大約是9型的40倍。 |
PHP.S | 能夠感染外周神經元 |
Retro | 逆向標記血清型 |
吉凱為您總結不同部位適合的血清型,供您參考。
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1 | 2 | 5 | 6 | 8 | 9 | DJ | PHP.eB | PHP.S | Retro |
心臟 | √ |
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肝臟 |
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肺 |
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胰腺 |
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骨骼肌 | √ | √ |
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神經 | √ | √ | √ |
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眼部 |
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√ | √ | √ |
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吉凱小建議:
1. 如您不確定選擇哪種血清型,可嘗試使用感染譜最廣的9型。
2. 如初次使用AAV,可使用AAV彩虹裝進行預實驗,通過彩虹裝比較不同血清型對目標組織的感染效果,摸索最佳的注射方法、注射位點、病毒用量等,以便得到更理想的實驗結果。
AAV彩虹裝
AAV彩虹裝是吉凱基因通過查詢相關文獻,將適合不同組織的常用血清型組合而成的套裝產品。點擊購買AAV彩虹裝>>
彩虹裝 | 血清型 | 提供量 |
眼/其他器官 | 1/2/5/6/8/9/DJ | 10μL/種血清型 |
神經系統 | 1/9/Retro/PHP. eB | 10μL/種血清型 |
肝臟/腎臟 | 2/8/9/DJ | 100μL/種血清型 |
心臟/血管/肌肉 | 1/6/8/9 | 100μL/種血清型 |
*各血清型在神經系統研究中作用:1型,可作為順行示蹤跨單突觸標記的血清型使用 ;9型,可作為順行示蹤非跨突觸標記的血清型使用;Retro,可作為逆向示蹤非跨突觸標記的血清型使用; PHP.eB,適合中樞神經系統,可穿過血腦屏障、胎盤屏障,常通過尾靜脈注射使用 。
吉凱提供多種AAV載體,可通過過表達、RNAi等技術操作編碼基因和非編碼基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。點擊查看載體圖譜>>
調控方式 | 載體編號 | 元件順序 | 載體容量(bp) | 熒光 |
熒光是否 融合表達 |
過表達 | GV388 | CMV bGlobin-MCS-EGFP-3FLAG-WPRE -hGH polyA | 1207 |
EGFP |
融合 |
GV389 | CMV bGlobin-MCS-mCherry-3FLAG-WPRE-hGH polyA | 1207 | mCherry | 融合 | |
GV410 | CMV bGlobin-MCS-3FLAG-T2A-EGFP | 1130 | EGFP | 非融合 | |
GV411 | CMV-betaGlobin-MCS-3Flag-SV40 PolyA | 2819 |
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GV461 | CMV-betaGlobin-MCS-SV40 PolyA | 2890 |
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GV467 | CMV- betaGlobin-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA | 2095 | EGFP | 融合 | |
GV489 | CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA | 1285 | EGFP | 融合 | |
GV466 | hSyn promoter-MCS-EGFP-3FLAG-SV40 PolyA | 2186 | EGFP | 融合 | |
GV475 | hSyn promoter-MCS-mcherry-3FLAG-SV40 PolyA | 2186 | mCherry | 融合 | |
GV488 | gfaABC1D promoter-MCS-EGFP-WPRE-bGH PolyA | 1591 | EGFP | 融合 | |
干擾 | GV478 | U6-MCS-CAG-EGFP |
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EGFP | 非融合 |
GV480 | U6-MCS-CAG-mCherry |
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mCherry | 非融合 | |
miRNA-up | GV412 | CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA |
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EGFP | 非融合 |
GV413 | CMV bGlobin-mCherry-MCS -WPRE-hGH polyA |
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mCherry | 非融合 | |
miRNA-down | GV479 | U6-MCS-CAG-EGFP |
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EGFP | 非融合 |
GV480 | U6-MCS-CAG-mCherry |
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mCherry | 非融合 |
1. AAV 在神經系統中的應用
代表文獻 吉凱客戶文章Molecular Psychiatry,(2017)00,1-13
文獻來源:Gene deficiency and pharmacological inhibition of caspase-1 confers resilience to chronic social defeat stress via regulating the stability of surface AMPARs.
代表文獻 吉凱客戶文章Neuropharmacology, 128(2018) 207-220.
文獻來源:Inhibition of Cdk5 rejuvenates inhibitory circuits and restores experience-dependent plasticity in adult visual cortex.
2. AAV在眼科中的應用
代表文獻 Science,2010,329(5990):413
文獻來源:Genetic reactivation of cone photoreceptors restores visual responses in retinitis pigmentosa.
3. AAV 在肝臟中的應用
代表文獻 吉凱客戶文章Cellular physiology and biochemistry,2016,40(5):1117
文獻來源:Mesenchymal stem cells with enhanced Bcl-2 expression promote liver recovery in a rat model of hepatic cirrhosis.
4. AAV 在脂肪中的應用
代表文獻 吉凱客戶文章Jci Insight,2017,2(4):e89044
文獻來源:Switching harmful visceral fat to beneficial energy combustion improves metabolic dysfunctions.