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淘基因
慢病毒與其他病毒工具比較，具有以下優勢：
a. 表達時間長：慢病毒通過將外源基因整合到宿主細胞基因組上，可實現目的基因長時間穩定的表達，不隨著細胞分裂傳代而丟失，是細胞實驗的首選；
b. 安全性高：未發現致病性，已被用于CAR-T 治療作用于人體；
c. 免疫原性低： 直接注射活體組織不易造成免疫反應，適用于動物實驗。
| 病毒表達系統 |
腺病毒 (Adenovirus) |
慢病毒 (Lentivirus) |
腺相關病毒 (Adeno-As sociate virus) |
| 病毒基因組 | 雙鏈DNA病毒 | RNA病毒 | 單鏈DNA病毒 |
| 復制 | 條件復制 | 不可復制 | 條件復制 |
| 滴度 | 最高可達1012pfu/ml | 最高可達109TU/ml | 最高可達1012-13v.g/ml |
| 感染細胞類型 | 感染分裂和不分裂細胞 | 感染分裂和不分裂細胞 | 感染分裂不旺盛的細胞 |
| 表達豐度 | 高水平表達 | 中到高水平表達 | 高水平表達 |
| 表達時間 | 快(1-2天) | 慢(2-4天) | 1-2周 |
| 持續表達時間 |
病毒基因組游離于宿主基因組外， 瞬時表達外源基因 |
病毒基因組整合于宿主基因組， 長時間、穩定表達外源基因 |
病毒基因組游離于宿主基因組外， 在分裂旺盛的細胞中可長時間表達 |
| 克隆容量 | 適合表達小于5kb的外源片段 | 適合表達小于4kb的外源片段 | 適合表達小于2.8kb的外源片段 |
| 免疫原性 | 較高免疫原性 | 低免疫原性 | 低免疫原性 |
| 安全性 | 可能會引起一些咳嗽流涕 |
暫無發現致病性， 已被用于CAR-T治療作用于人體 |
暫無發現致病性， 已通過歐盟和FDA許可， 用作基因治療藥物的載體 |
吉凱獨有的病毒分級純化工藝，滿足您從永生化細胞到原代和干細胞，從動物體內水平到cGMP細胞治療等不同實驗需求：
A級慢病毒純化工藝:
通過超速離心初步濃縮慢病毒顆粒，同時去除病毒上清中的血清蛋白和宿主蛋白，大部分質粒DNA和宿主DNA，然后應用超濾，
進一步濃縮，去除質粒DNA和宿主DNA，獲得高純度慢病毒產品。
B級慢病毒純化工藝:
通過切向流過濾系統，在濃縮慢病毒的同時，極大程度地去除DNA殘留和蛋白殘留，同時通過超濾進一步濃縮和純化，獲得超純
慢病毒產品。
C級慢病毒純化工藝:
通過陰陽離子交換層析，特異性吸附慢病毒顆粒，然后運用鹽離子洗脫，獲得可用于臨床試驗的慢病毒產品。
慢病毒質量檢測標準:
FDA和《中國藥典》中針對病毒疫苗等制劑提出了病毒滴度（≥2E+8TU/ml），質粒殘留（≤4E+8-copy/ml），宿主DNA
殘留（≤10ng/ml），BSA殘留（≤50ng/ml）等產品質量和安全性的純度要求，同時針對污染和載體安全性，提出了支原體，
細菌等微生物安全和RCL的要求。吉凱基因根據中國藥典法質量標準，將病毒樣品送至專業檢測機構，嚴格測定每一生產批次慢
病毒的各項指標。
| 檢測項目 | 檢測方法 | 檢測結果 | 單位 | 參考檢測范圍 |
| 支原體 | Nest PCR | 陰性 | .. | 陰性 |
| 內毒素 | LAL | 合格 | EU/mI | ≤50 |
| 衣原體 | 培養法 | 陰性 | .. | 陰性 |
| 細菌 | 培養法 | 陰性 | .. | 陰性 |
| 真菌 | 培養法 | 陰性 | .. | 陰性 |
| 活性滴度 | 絕對定量 | 1.00E+08 | TU/mI | ≥1E+8TU |
吉凱病毒質量檢測標準
慢病毒鑒定方法：
吉凱基因使用精準的絕對定量qPCR法與GFP熒光計數法檢測活性病毒的感染滴度。這兩種檢測方法直接測定的是插入到細胞基
因組的病毒基因組拷貝數，最接近真實滴度。而絕對定量qPCR法更是醫療級病毒產品公認的滴度檢測方法，測定滴度更準確，
杜絕虛假。
| 檢測項目 | 原理 | 優點 | 缺點 |
| GEP熒光計數法 | FACS(流式細胞計數) |
經典方法，重復性好 檢測活性病毒的感染滴度 |
對儀器和操作要求高 操作復雜 |
|
絕對定量qPCR法 (DNA定量法) |
病毒感染工具細胞后，抽提整合目的片段的細胞基因組DNA,與標準品比較 |
檢測活性病毒的感染滴度 最接近真實滴度 |
對儀器和操作要求高 操作復雜 |
|
RT-qPCR法 ( RNA基因組法) |
病毒梯度稀釋感染工具細胞后，抽提RNA,RT-qPCR檢測病毒基因組表達 | 檢測活性病毒的感染滴度 |
受限于病毒感染后檢測 基因的表達豐度 |
|
p24核心蛋白 ELISA定量法 |
利用慢病毒顆粒穩定表達的p24蛋白進行ELISA檢測 | 簡單，快捷，重復性好 | 反映的是病毒物理顆粒數不是活性滴度 |
市場常見滴度檢測方法比較
| 調控方式 | 載體編號 | 元件順序 | 原核抗性 | 真核抗性 |
熒光標記 啟動子 |
熒光標記 |
RNAi/過表達 啟動子 |
| 過表達 | GV365 |
Ubi-MCS-3FLAG -CMV-EGFP |
Ampicillin | 無 | CMV | GFP | Ubiquitin |
| GV320 |
Ubi-MCS-3FLAG -SV40-Cherry |
Ampicillin | 天 | SV40 | Cherry | Ubiquitin | |
| GV341 |
Ubi-MCS-3FLAG -SV40-puromycin |
Ampicillin | Puromycin | 無 | 無 | Ubiquitin | |
| GV358 |
Ubi-MCS- 3FLAG -CMV-EGFP |
Ampicillin | Puromycin | SV40 | GFP | Ubiquitin | |
| GV492 |
Ubi-MCS-3FLAG- CBh-gcGFP-IRES -puromycin |
Ampicillin | Puromycin | CBh | GFP | Ubiquitin | |
|
過表達 Tet-on |
GV308 |
TetllP-MCS-3FLAG -Ubi-TetR-IRES -Puromycin |
Ampicillin | Puromycin | 無 | 無 | TtlIP |
| 干擾 | GV112 |
hU6-MCS -CMV- Puromycin |
Ampicillin | Puromycin | 無 | 無 | U6 |
| GV115 |
hU6-MCS-CMV- EGFP |
Ampicillin | 無 | CMV | GFP | U6 | |
| GV248 |
hU6-MCS-Ubiquitin -EGFP-IRES- puromycin |
Ampicillin | Puromycin | Ubiquitin | GFP | U6 | |
| GV298 |
U6-MCS-Ubiquitin -Cherry-IRES- puromycin |
Ampicillin | Puromycin | Ubiquitin | Cherry | U6 | |
| GV493 |
hU6-MCS-CBh- gcGFP-IRES- puromycin |
Ampicillin | Puromycin | CBh | GFP | U6 | |
| 干擾Tet-on | GV307 |
TetlIP-TurboRFP -MCS(MIR30)-Ubi- TetR-IRES -Puromycin |
Ampicillin | Puromycin | TetlIP | RFP | TetlIP |
| miRNA-up | GV369 |
Ubi-MCS-SV40 -EGFP-IRES -puromycin |
Ampicillin | Puromycin | SV40 | GFP | Ubiquitin |
| GV209 |
H1-MCS-CMV -EGFP |
Ampicillin | 無 | CMV | GFP | H1 | |
| GV309 |
hU6-MCS-Ubiquitin -EGFP-IRES -puromycin |
Ampicillin | Puromycin | Ubiquitin | GFP | U6 | |
| miRNA-down | GV280 |
hU6-MCS-Ubiquitin -EGFP-IRES -puromycin |
Ampicillin | Puromycin | Ubiquitin | GFP | U6 |
| GV234 |
hU6-MCS-CMV -EGFP |
Ampicillin | 無 | CMV | GFP | U6 |
1. 細胞感染
慢病毒可有效感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞，對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。
2. 在體注射
2.1 神經系統
代表文獻 吉凱客戶文章Nature medicine，2010.16（12）：1439-1443.
文獻來源：Treatment of cerebral ischemia by disrupting ischemia-induced interaction of nNOS with PSD-95.
2.2 心血管系統
代表文獻 Circulation,2016：CIRCULATIONAHA,116.017949.
文獻來源：Inhibition of aberrant microRNA-133a expression in endothelial cells by statin prevents endothelial dysfunction by targeting GTP cyclohydrolase 1 in vivo.
2.3 肝臟
代表文獻 吉凱客戶文章 Joumal fo virology, 2016, 90(4): 1729-1740.
文獻來源：Hepatitis B virus X protein induces hepatic steatosis by enhancing the expression of liver fatty acid binding protein.
2.4 肺
代表文獻 Cell death & disease, 2017, 8(1): e2566.
文獻來源：MicroRNA-101 inhibits invasion and angiogenesis through targeting ITGA3 and its systemic delivery inhibits lung metastasis in nasopharyngeal carcinoma.
2. Cardiac Fibroblast-Specific Activating Transcription Factor 3 Protects Against Heart Failure by Suppressing MAP2K3-p38 Signaling. 2017, Circulation (IF=19.309). 吉凱產品：RNAi慢病毒 研究領域：心臟衰竭 首都醫科大學附屬北京安貞醫院
3. MicroRNA 301A Promotes Intestinal Inflammation and Colitis-Associated Cancer Development by Inhibiting BTG1. 2017, Gastroenterology (IF=18.392). 吉凱產品：microRNA慢病毒 研究領域：小腸和結腸炎癥 上海市第十人民醫院
4. A Critical Role of Presynaptic Cadherin/Catenin/p140Cap Complexes in Stabilizing Spines and Functional Synapses in the Neocortex. 2017, Neuron (IF=14.024). 吉凱產品：RNAi慢病毒 研究領域：神經 中國科學院神經科學研究所
5. EphrinB2 Regulates Cardiac Fibrosis Through Modulating the Interaction of Stat3 and TGF-β/Smad3 Signaling. 2017, Circulation Research (IF=13.965). 吉凱產品：RNAi慢病毒和過表達慢病毒 研究領域：心臟纖維化 浙江大學醫學院附屬第二醫院
6. Aldehyde dehydrogenase-2 (ALDH2) opposes hepatocellular carcinoma progression by regulating AMP-activated protein kinase signaling in mice. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凱產品：過表達慢病毒 研究領域：肝癌 第二軍醫大學
7. PD‐1 Checkpoint Blockade in Combination with an mTOR Inhibitor Restrains Hepatocellular Carcinoma Growth Induced by Hepatoma Cell‐Intrinsic PD‐1. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凱產品：過表達慢病毒 研究領域：肝癌 復旦大學附屬中山醫院
8. Distinct role of nuclear receptor corepressor 1 regulated de novo fatty acids synthesis in liver regeneration and hepatocarcinogenesis in mice. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凱產品：RNAi慢病毒 研究領域：肝再生和肝癌 第二軍醫大學
9. SIRT1/HSF1/HSPs Pathway is Essential for Exenatide-alleviated Lipid-induced Hepatic Endoplasmic Reticulum Stress. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凱產品：RNAi慢病毒 研究領域：肝臟內質網應激 中山大學附屬第三醫院
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