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      基因操作工具制備

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      您對神經示蹤病毒有什么問題嗎?

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      淘基因

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      神經示蹤病毒

      單純皰疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)屬于皰疹病毒科、α皰疹病毒亞科,為有囊膜的DNA病毒,其線性DNA基因組較大,遺傳改造空間大,可將大片段外源基因或多個外源基因同時引入病毒基因組。HSV具有HSV-1和HSV-2兩個亞型,HSV-1是廣泛存在的條件致病型病原體,其在初次感染宿主后便潛伏在三叉神經節,當宿主免疫力下降時病毒會復制并沿神經元軸突傳遞,誘發唇皰疹等癥狀。這種天然的嗜神經和跨突觸傳遞的特性使得其具有成為神經環路示蹤工具的潛能。

      H129毒株是HSV-1型病毒的一個臨床分離株,研究發現H129 在跨突觸傳遞時有明顯的順行偏向性。利用反向遺傳學和基因重組等手段,改造病毒基因組,敲除神經毒性基因并插入熒光基因,獲得了低毒力、攜帶熒光標記的重組工具病毒。經過改造的病毒,通過表達熒光標記實現高效、穩定的順行跨突觸示蹤神經元網絡

      優勢

      嗜神經病毒作為神經示蹤工具,與傳統的示蹤劑及其他病毒相比有如下特點:


      1. 可以跨突觸傳播;

      2. 可特異性順行傳播;

      3. 病毒可跨突觸復制,信號不衰減;

      4. 可攜帶標識物。

      產品列表

      同毒株的病毒對神經元的親和性和跨神經元傳遞的方向和跨突觸的數目都有不同,HSV-1-H129可順行跨多突觸,利用遺傳改造平臺對其基因組進行重組改造,獲得順行跨單級突觸傳遞和順行跨多級突出傳遞的神經環路示蹤病毒,具體產品信息如下:


      HSV-1-H129產品列表

      產品名稱 輔助病毒 滴度(pfu/ml) 熒光標記 功能
      H129-△TK-tdT 需要 大于5 x 108 tdTomato 順行跨單級
      H129-△TK-G4 需要 大于5 x 108 GFP 順行跨單級
      H129-G4 不需要 大于2 x 109 GFP 順行跨多級
      H129-R4 不需要 大于2 x 109 mCherry 順行跨多級
      H129-tdT2 不需要 大于2 x 109 tdTomato 順行跨多級
      更多相關產品持續開發中,歡迎咨詢


      輔助病毒產品列表

      輔助病毒 滴度(vg/ml) 熒光標簽 功能
      AAV-DIO-TK-2A-GFP 大于1 x 1012 GFP 輔助HSV在特定類型神經元中復制并傳遞至下一級神經元
      AAV-DIO-TK-2A-tdT 大于1 x 1012 tdTomato
      AAV-TK-2A-GFP 大于1 x 1012 GFP 輔助HSV復制并傳遞至下一級神經元
      AAV-TK-2A-tdT 大于1 x 1012 tdTomato
      更多輔助病毒持續開發中,歡迎咨詢

      應用實例

      實驗目的:順行跨單級示蹤小鼠嗅球(OB)下游直接投射神經元;;

      使用病毒:AAV-TK-GFP,H129-dTK-tdT;

      病毒劑量:AAV-TK-GFP:450nl(1.0 x 1012vg/ml),

      H129-dTK-tdT:400nl(5.0 x 108pfu/ml);

      實驗結果:H129-dTK-tdT注射后10天取材觀察,OB的直接下游投射腦區Pir、Ent、ACo、PLCo等均被清晰的標記了出來;

      圖2:順行跨單級HSV示蹤小鼠嗅球輸出環路(H Yang, et al., NeuroscienceBulletin, 2020)


      實驗目的:順行跨突觸示蹤小鼠嗅球(OB)下游多級投射神經元;

      使用病毒:H129-G4;

      注射位點:小鼠嗅球(OB)

      病毒劑量:400nl(5.0 x 109pfu/ml);

      實驗結果:病毒注射后3天取材觀察,OB下游的Pir、Ent、CA1、ACo、PLCo等腦區神經元均被清晰的標記了出來;

      圖1:順行跨多級HSV示蹤小鼠嗅球輸出環路(H Yang, et al., Neuroscience Bulletin, 2020)。

      使用參數推薦

      順行跨多級示蹤時神經示蹤病毒使用參數

      *以下不同腦區HSV使用劑量、注射坐標等都來源于文獻,由于不同實驗中操作人員手法、儀器誤差、動物大小不同,在實際使用時需做調整,以下數據僅供參考

      動物

      腦區

      坐標(mm)

      H129-G4

      取材

      時間
      (dpi)

      AP

      ML

      DV

      劑量(pfu)

      體積(μl)

      C57BL/6

      Retina

      NA

      NA

      NA

      5.0x106

      1.00

      4

      C57BL/6

      OB

      +4.28

      +0.50

      -2.50

      2.0x106

      0.40

      3

      C57BL/6

      M1

      +1.54

      -1.70

      -1.75

      1.0x106

      0.20

      3

      C57BL/6

      AD

      -0.82

      -0.75

      -2.75

      4.0x105

      0.08

      3

      C57BL/6

      CeA

      -1.00

      -2.64

      -4.30

      3.0x105

      0.06

      1.5

      C57BL/6

      αBLA

      -1.34

      +3.40

      -4.80

      5.0x105

      0.10

      1-2

      C57BL/6

      VPM

      -1.82

      +1.40

      -3.62

      1.0x106

      0.20

      3

      C57BL/6

      CA1

      -2.00

      +1.50

      -1.60

      2.9x105

      0.12

      1.5

      C57BL/6

      LGN

      -2.30

      +2.13

      -2.75

      5.0x105

      0.10

      3

      C57BL/6

      pBLA

      -2.30

      +3.40

      -4.85

      5.0x105

      0.10

      1-2

      C57BL/6

      AuD

      -2.80

      -4.13

      -1.68

      2.0x105

      0.04

      3

      C57BL/6

      V2L

      -2.80

      -3.15

      -1.25

      2.0x105

      0.04

      3

      C57BL/6

      V1

      -3.52

      +2.30

      -1.15

      5.0x105

      0.10

      3

      C57BL/6

      IC

      -5.20

      +1.40

      -2.00

      2.0x105

      0.04

      3

      SD大鼠

      M1

      +3.00

      -2.60

      -2.20

      5.0x105/2.5x106

      0.10/0.50

      3

      樹鼩

      M1

      +1.85

      -2.60

      -2.10

      1.5x106

      0.30

      6


      順行跨單級示蹤時神經示蹤病毒使用參數

      *以下不同腦區HSV及輔助病毒使用劑量、注射坐標等都來源于文獻,由于不同實驗中操作人員手法、儀器誤差、動物大小不同,在實際使用時需做調整,以下數據僅供參考

      動物

      腦區

      輔助AAV


      H129-dTK-tdT

      取材時間(Day)

      AAVs
      (1x1012v.g/ml)

      體積(μl)

      注射

      時間

      劑量

      (pfu)

      體積(μl)

      注射

      時間

      起始

      神經元

      投射

      神經元

      C57BL/6

      MOB

      AAV2/9-TK-GFP

      0.45

      Day1

      2.0x105

      0.40

      Day22

      Day25

      Day29

      C57BL/6

      αBLA

      AAV2/9-TK-GFP

      0.20

      Day1

      5.0x104

      0.10

      Day22

      Day25

      Day27

      C57BL/6

      VPM

      AAV2/9-TK-GFP

      0.20

      Day1

      1.0x105

      0.20

      Day22

      Day25

      Day32

      C57BL/6

      LGN

      AAV2/9-TK-GFP

      0.20

      Day1

      1.0x105

      0.20

      Day22

      Day25

      Day32

      C57BL/6

      pBLA

      AAV2/9-TK-GFP

      0.20

      Day1

      5.0x104

      0.10

      Day22

      Day25

      Day27

      PV-Cre

      nRT

      AAV2/9-DIO-TK-GFP

      0.35

      Day1

      1.25x105

      0.25

      Day22

      Day25

      Day32

      DAT-Cre

      VTA

      AAV2/9-DIO-TK-GFP

      0.35

      Day1

      1.25x105

      0.25

      Day22

      Day25

      Day32

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